兒童糖尿病的谷氨酸脫羧酶抗體檢測

兒童糖尿病的谷氨酸脫羧酶抗體檢測

中華兒科雜志 1998年第10期第0卷 論著摘要

作者：龍秀榮　杜文斌　蘇鐘浦　魏慶琤

單位：110003 沈陽，中國醫科大學第二臨床學院(龍秀榮)，基礎醫學院化學免疫研究室(蘇鐘浦)，預防醫學院衛生統計教研組(魏慶)；遼寧省糖尿病研治中心(杜文斌)

　　近年來有關糖尿病谷氨酸脫羧酶抗體(GAD-Ab)測定對Ⅰ型糖尿病診斷，Ⅰ、Ⅱ型糖尿病鑒別診斷及對Ⅰ型糖尿病的預測等方面資料在國內外相繼有報道，我們采用免疫雙擴散法對16例兒童期間發生的Ⅰ型糖尿病進行了GAD-Ab測定，證明GAD-Ab可作為兒童糖尿病的診斷指標。

　　對象：實驗組16例，均為Ⅰ型糖尿病住院患兒和糖尿病出院後隨訪的患兒。其中男9例，女7例。發病年齡9個月～13歲6個月，其中9個月～5歲3例，～10歲9例，～13歲6個月4例。病程2周～7年，其中病程2周～6個月9例，～1年3例，＞1年4例。16例均符合Ⅰ型糖尿病診斷標准。主訴或家屬回顧病史均具有三多一少症狀。尿糖定性均為(++)～(++++)，空腹血糖高於正常，最低者12.4 mmol/L，最高者33.5 mmol/L(正常值3.9～6.1 mmol/L)。來診時尿酮體均為陽性，其中10例伴有酮症酸中毒或酮症酸中毒昏迷。血胰島素定量降低(基礎值)，最低者0.4 μIU/ml，最高者8.5 μIU/ml(正常值18.6＋8.6 μIU/ml)。血C肽(基礎值)也明顯降低，最低者4.3 pmol/L，最高者69.3 pmol/L(正常256～1300 pmol/L)。對照組20例均為健康普查兒童，臨床無糖尿病症狀，尿糖陰性，血糖正常的健康兒童。

　　方法：(1)受試者清晨空腹取靜脈血2毫升，置於備用的試管內，離心(3 000 r/min)，15分鐘，取血清於-30℃冰箱內保存，全部標本在同一次實驗內完成。(2)特異性抗原GAD制備：從新鮮豬腦提取，由中國醫科大學免疫化學研究室提供。血清GAD-Ab的檢測采取免疫雙擴散法。(3)結果判定：標本中有沉澱線生成為陽性，未產生沉澱線者為陰性。

　　結果：實驗組16例，其中14例GAD-Ab陽性(14/16例，87.5%)，2例陰性。病程2周～6個月的9例中GAD-Ab均陽性，病程6個月～1年的3例中陽性1例，陰性2例，病程＞1年(最長者7年)的4例中GAD-Ab均陽性。2例陰性者分別在＜5歲年齡組和～10歲年齡組。對照組20例GAD-Ab全部陰性。

　　討論：人們已經發現Ⅰ型糖尿病胰島炎現象，即淋巴細胞浸潤胰島，以後相繼在Ⅰ型糖尿病患者中發現了抗胰島細胞自身抗體(ICA)，抗胰島素抗體(IAA)、羧肽酶抗體、熱休克蛋白抗體，至1990年Beakkeskov證明Ⅰ型糖尿病患者血清中存在的64 K抗體就是GAD自身抗體，且認為GAD是Ⅰ型糖尿病自身免疫反應的關鍵抗原。從免疫學指標診斷Ⅰ型糖尿病，無論IAA、ICA、GAD-Ab都很有意義，但隨著病程的推移IAA、ICA，在血液中逐漸消失轉陰，而GAD-Ab陽性率和水平都保持高值。文獻也曾報道Ⅰ型糖尿病患者該抗體一旦出現即保持穩定，不隨病程延長而抗體滴度減弱或轉陰。本實驗結果也表明，GAD-Ab陽性與否與病程長短、發病年齡大小均無關。

　　我們采用的實驗方法為免疫雙擴散法的改良法。實驗的關鍵是特異性抗原GAD的制備和濃度測定，其次是特異性抗原抗體反應形成沉澱線的判定。此法優點：操作簡便、不用更多的特殊儀器，價格低廉，真實性高。自實驗開展以來對101例正常人和39例Ⅰ型糖尿病患者進行了血中GAD-Ab測定，結果正常人101例抗體均陰性，39例糖尿病中32例抗體陽性，陰性7例。靈敏度=32/(32+7)×100%=82.05%；特異度=101/(101+0)×100%=100%，無假陽性者，與國外報道相近。將實驗中的兒童糖尿病16例及正常兒童對照者20例實驗結果取出，其中抗體陽性14例，陽性率87.5%，表明兒童期間發生的Ⅰ型糖尿病GAD-Ab水平也很高，其靈敏度與國內外報道的成年組Ⅰ型糖尿病GAD-Ab靈敏度相一致，因此GAD-Ab可作為兒童期Ⅰ型糖尿病的免疫學診斷指標。

　　16例兒童糖尿病中2例抗體陰性，其原因可從以下三方面考慮：(1)該2例病情明顯好轉，尿糖轉陰，胰島素用量很少或不用，GAD-Ab陰性。此種現象是否與胰島β細胞在接受免疫攻擊後能主動地迅速進行修復，大多數浸潤的炎性細胞被清除有關，其中1例發病年齡9個月，門診以糖尿病酮症酸中毒昏迷收住ICU病房，血糖33.5 mmol/L，尿糖(++++)，追問病史入院前半個月開始多尿，消瘦。搶救48小時脫險後轉入內分泌病房，經飲食及胰島素治療20天後病情明顯好轉。出院後一直隨訪7個月，患兒生長發育良好，每日中效胰島素3 IU，尿糖持續在(-)～(±)～(+)，糖化血紅蛋白8%。另1例7歲。病程9個月出院時病情進入“蜜月期”，遵循糖尿病飲食，增加體育運動，停用胰島素，尿糖仍為(-)～(+)。(2)本實驗可出現假陰性，可否因抗體滴度較弱造成實驗假陰性結果，該2例患兒應該取血重新復查。(3)該2例患兒GAD可否為其它特殊亞型，導致特異性抗原抗體反應呈陰性。由於我們觀察的病例少，論據不充分，有待於進一步深入研究。

　　總之，實驗證明兒童期發生的Ⅰ型糖尿病確實存在GAD-Ab且水平較高，靈敏度與成年組Ⅰ型糖尿病的靈敏度相一致，並且抗體的存在不受病程長短的影響，因此GAD-Ab可作為兒童期Ⅰ型糖尿病較可靠的免疫學指標。由於實驗的方法簡便，價格低廉，可重復，可大量使用，特異度100%，靈敏度與國外報道相近，無假陽性，因此為較短時間內測定大批血樣提供了可能，可在無糖尿病家族史的人群中進行普查，確定可能發展為Ⅰ型糖尿病的高危人群，繼而采取措施干預胰島免疫損傷的進展，達到預報和預防糖尿病的目的。

(收稿：1997-12-25　　修回：1998-06-17)